Med-Practic
Посвящается выдающемуся педагогу Григору Шагяну

События

Анонс

У нас в гостях

Aктуальная тема

Методы диагностики

Методы исследования онкобелка HER-2-neu (обзор литературы)

Основные представления о рецепторе HER-2/neu. Активация и гиперэкспрессия клеточных онкогенов, как известно, играет важ-ную роль в развитии злокачественных опухолей различной этиологии [1]. Одним из важнейших продуктов экспрессии онкогенов является рецептор известный как Human Epidermal Growth Factor Receptor-2 (HER-2) [3], который также известен как HER-2/neu или c-erbB-2, т.к. структурно и функционально схож с  с-erbB онкогеном ретровирусной природы [4]. HER-2/neu является частью семейства онкогенов с-erbB, включающего еще три рецептора HER-1, HER-3, HER-4.

 

Белок HER-2/neu- это трансмембранная рецепторная тирозинкиназа, экспрессирующаяся преимущественно на эпителиальных клетках и кодируемая геном, локализованным в 17q хромосоме. Молекулярная масса рецептора HER-2/neu составляет 185 килодальтон (kDa), поэтому его также иногда называют белком р185.Молекула рецептора состоит из внутреннего тирозинкиназного домена, небольшой трансмембранной части, а также из внеклеточного домена (ВКД), который подобен таковым и у других членов HER- семейства [2,3]. Внеклеточная часть рецептора является высоко гликолизированным белком с молекулярной массой от 97 до 115 kDa и определяется как в среде культивирования некоторых линий клеток РМЖ, так и в плазме или сыворотке  [8] крови здоровых женщин и больных РМЖ. Механизм активации HER-2/neu в настоящее время не совсем понятен, но исследования показали, что рецепторы семейства HER образуют гомо- и гетеродимеры, в результате чего активируются внутренние тирозинкиназы и весь последующий каскад событий регулируемого ими сигнального пути [6]. Лиганд к рецептору HER-2/neu до настоящего времени не обнаружен. Родственные рецепторы активируются многочисленными лигандами, среди которых собственно эпидермальный фактор роста (ЭФР), а-трансформирующий фактор роста, амфирегулин и др., активирующие рецептор 1 типа  HER-1, а также, открытое относительно недавно, семейство пептидных лигандов, названных неурегулины, имеющие молекулярную массу около 45kDa и взаимодействующие преимущественно с рецепторами HER-3 и HER-4. 

 

Методы определения HER-2/neu. Методы оценки экспрессии HER-2/neu в ткани основаны на двух подходах: определение изменений на белковом (по гиперэкспрессии белка на мембране клетки) или на геномном уровне (по амплификации гена HER-2/neu). 

 

Наиболее широко используемый метод определения гиперэкспрессии белка HER-2/neu является иммуногистохимический (ИГХ) [11] , для определения числа копий или амплификации гена HER-2/neu исполь-зуется метод флюоресцентной гибридизации in situ (Fluorescent In Situ Hybridization -FISH). Иммуноферментный анализ используется с 1991 года и позволяет проводить количественный анализ как в ткани опухоли, так и в сыворотке крови.

 

Американское управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов FDA (Food and Drug Administration)   одобрило два вида антител для иммуногистохимического выявления больных, являющихся кандидатами для терапии герцептином. Они включают Herceptest (DAKO Cytomation, Copenhagen, Denmark) и Pathway (Ventana, Medical Systems, Tucson, AZ). Стандартизированная система подсчета и интерпретации результатов иммуногистохимического анализа была разработана с помощью стандартных клеточных линий. В данной системе клетки, содержащие менее 20000 рецепторов, не покажут ника-кого окрашивания (0). Клетки, содержащие приблизительно 100000 рецепторов, показали бы частичное окрашивание мембраны - менее, чем у 10 % клеток (1+). В клетках, содержащих около 500000 рецепторов, пол-ное окрашивание будет наблюдаться в более чем 10% клеток (2+). Полное и сильное окрашивание мембраны больше чем у 10% клеток, показали бы клетки, содержащие приблизительно 2300000 рецепторов (3+) [5].

 

Вторая методика, используемая для определения HER-2/neu статуса - это FISH-анализ (флуоресцентная in situ гибридизация). Преимущества данной методики заключается в возможности определить амплификацию или количество копий гена, кодирующего рецептор HER-2/neu. Техника FISH-анализа очень надежна, обеспечивая чувствительность 95,5% и 100% специфичность для обнаружения амплификации гена HER-2/neu. В настоящее время применяются два коммерческих набора для FISH анализа, разрешенные к применению FDA: PathVysion (Vysis, Downers Grove, IL), рекомендованный для пациенток с региональными метаста-зами, подлежащих адъювантной терапии антрациклин-содержащими схемами, а также для выявления группы больных, у которых возможна терапия герцептином, и Inform Test (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ), используемый в качестве прогностического фактора у пациенток с раком молочной железы  (РМЖ) без региональных метастазов [7].

 

Иммуногистохимический метод достаточно прост в выполнении и может применяться в условиях большинства патологоанатомических лабораторий, FISH-метод более дорогостоящий и трудоемкий, требующий специального оборудования. Поэтому, как правило, второй метод используется для подтверждения или уточнения результатов, полученных с использованием иммуногистохимического анализа  [10].

 

Позже была предложена новая методика CISH (chromogenic in situ hybridization), как альтернатива FISH-методу. Данная методика основана, в отличие от флюоресцирующей техники, на пероксидазной реакции, ко-торая может визуализироваться с помощью обычного микроскопа и устра-няет потребность во флуоресцентном оборудовании. Хотя технические преимущества CISH по сравнению с FISH методом были продемон-стрированы, однако, в настоящее время FDA не рекомендует исполь-зовать данную методику в клинической практике. Необходимо продол-жать исследования, чтобы с полной уверенностью утверждать адек-ватность двух методов. Сравнение иммуногистохимического и FISH методов показало значительную степень соответствия результатов. Множество сообщений говорит о более чем 90% совпадений ИГХ и FISH результатов при гиперэкспрессии HER-2/neu (3+), в некоторых случаях достигая 100%  [7]. 

 

Третий метод, используемый для определения статуса HER-2/neu - это иммуноферментный метод. Определение сывороточного HER-2/neu про-водится иммуноферментным методом с использованием стандартного набора реактивов HER-2/neu компании Oncogene Science/Bayer HealthCare LLC (США).

 

Он может использоваться для количественного определения всего белка р185 в опухоли или его циркулирующего растворимого фрагмента в плазме или сыворотке крови. Zabrecky и др. [9], используя монокло-нальные антитела, направленные на ВКД HER-2/neu, продемонстрирова-ли, что фрагмент рецептора HER-2/neu мигрировал во внеклеточную среду. В последние несколько лет описано множество иммуноферментных методик, используемых для определения ВКД в плазме и сыворотке больных РМЖ и контрольных группах здоровых женщин. Однако отсутствие стандартизации этих методов затрудняет сравнение результатов, полученных разными авторами. 

 

В целом, ИГХ и FISH методы - это единственные тесты, рекомен-дованные FDA для выявления групп больных метастатическим РМЖ, подлежащих терапии герцептином [7]. В настоящее время ИГХ и FISH методы используются в комплексе, что позволяет более точно отбирать группы пациенток для таргетной терапии.

 

Литература

 

  1. Aaronson SA. Growth factors and cancer. Science 1991; 254:1146- 1153.
  2. Bargmann CI, Hung MC, Weinberg RA. The neu oncogene encodes an epidermal growth factor receptor related protein. Nature 1986; 319:226- 230.
  3. Brandt-Rauf PW, Pincus MR, Carney WP. The c-erbB-2 protein in oncogenesis: molecular structure to molecular epidemiology. Crit Rev Oncog. 1994;5(2-3):313-29.
  4. Coussens L, Yang-Feng TL, Liao Y-C, Chen E, Gray A, McGrath J, et al. Tyrosine kinase receptor with extensive homology to EGF receptor shares chromosomal location with neu oncogene. Science 1985; 230:1132-1139.
  5. Hayes DF, Thor AD. c-erbB-2 in breast cancer: development of a clinically useful marker. Semin Oncol 2002; 29:231-245.
  6. Kurebayshi J. Biological and clinical significance of HER2 overexpression in breast cancer. Breast Cancer 2001;8:45-51.
  7. Mass RD, Proc Am Soc Clin Oncol, abstract 19, 2000
  8. Pupa SM, Menard S, Morelli D, Pozzi B, De Palo G, Colnaghi MI. The extracellular domainof the c-erbB-2 oncoprotein is released from tumor cells by proteolytic cleavage. Oncogene 1993; 8:2917-2923.
  9. Ross JS, Fletcher JA. BER-2/neu (c-erbB2) gene and protein in breastcancer. Am J Clin Pathol 1999; 112:S53-S67.
  10. Schaller G, Evers K, Papadopoulos S, Ebert A, Buhler H. Current use of HER2 tests. Ann Oncol 2001;12:S97-S 100.
  11. Zabrecky JR, Lam T, McKenzie SJ, Carney W. The extracellular domain of pi 85 is released from the surface of human breast carcinoma cells, SK-BR-3. J Biol Chem 1991; 266:1716-1720.

Автор. Алексанян С.Г., Oтделениe клинической пато-морфологии НЦ Онкологии им.В.А.Фанарджяна.
Источник. Вестник Хирургии Армении им. Г.С. Тамазяна 2.2012
Информация. med-practic.com
Авторские права на статью (при отметке другого источника - электронной версии) принадлежат сайту www.med-practic.com
Share |

Вопросы, ответы, комментарии

Читайте также

Современные методики лабораторно-инструментального нейромониторинга при субарахноидальном кровоизлиянии и черепно-мозговой травме

Ключевые слова: субарахноидальное кровоизлияние, черепно-мозговая травма

Введение

В основе интенсивной терапии субарахноидального кровоизлияния (САК) и чрепно-мозговой травмы (ЧМТ) лежит теория о первичном и вторичном поражении головного мозга...

Неврология Медицинский Вестник Эребуни 2.2012 (50) Радиология и комбустиология
Неизмененная забрюшинная жировая клетчатка, по данным ультразвукового исследования и компьютерной томографии

Ключевые слова: забрюшинная жировая клетчатка, ультразвуковое исследование, компьютерная томография

Введение. Жировая клетчатка относится к каркасным субстанциям тела человека и находится в тесном анатомо-физиологическом взаимодействии с внутренними органами в силу наличия широкой сети сосудистых коллатералей и лимфатических сосудов...

Медицинский Вестник Эребуни 2.2012 (50) Радиология и комбустиология
Биопсия сторожевого лимфоузла при раке молочной железы (обзор литературы)

В последние годы благодаря более раннему выявлению рака молочной железы (РМЖ)  значительно увеличилось количество больных с не пораженными метастазами лимфоузлами, у которых подмышечная лимфодиссекция (ПЛД) считается избыточной процедурой...

Онкология Вестник Хирургии Армении им. Г.С. Тамазяна 2.2012
Оценка эффективности эндовенозной лазерной коагуляции варикозных вен нижных конечностей методом дуплексного сканирования

Целью настоящего исследования явилось выявление состояния стволов поверхностных вен нижних конечностей после эндовенозной лазерной коагуляции в сочетании с кроссэктомией и минифлебэктомией по поводу варикозной болезни...

Кардиология, ангиология Методы лечения
Изучение влияния клинических, социо-демографических факторов и средней длительности лечения на формирование диагностически связанных групп (нефрологический профиль)

Традиционный подход к процессу формирования диагностически связанных групп (ДСГ), соответствующий идее разработчиков системы ДСГ в США, основан на анализе фактических данных большого числа госпитализированных больных...

Нефрология Научно-медицинский журнал НИЗ 3.2011
Сравнительная характеристика эхокардиографических показателей ремоделирования миокарда левого желудочка у больных с ишемической кардиомиопатией и идиопатической дилатационной кардиомиопатией

Ишемическая кардиомиопатия (ИКМП) – это типичное проявление дезадаптивного ремоделирования ЛЖ вследствие замещения значительной части погибших кардиомиоцитов фиброзной тканью...

Кардиология, ангиология Научно-медицинский журнал НИЗ 3.2011 Радиология и комбустиология
Вопросы диагностики врожденного пилоростеноза у детей

Ключевые слова: врожденный пилоростеноз, рвота

Врожденный пилоростеноз – генетически обусловленное заболевание, причиной которого является перерождение мышечного слоя пилорического отдела, его утолщение, что связано с нарушением иннервации...

Детские болезни Медицинский Вестник Эребуни 2.2011 (46)
Диагностическая значимость лейкоцитарных индексов при раке толстой кишки

Проведено исследование интегральных показателей лейкоцитарной формулы крови у 104 больных с  неосложненными формами первичного рака толстой кишки (РТК) в зависимости от стадии опухолевого процесса...

Гастроэнтерология, гепатология Онкология Вестник Хирургии Армении им. Г.С. Тамазяна 2.2011
Патогенез, этиология, диагностика и лечение неврозов (гипотеза электрического голода мозга)

Головной мозг сложный и уникальный механизм. Он функционирует посредством использования электрической энергии. Мы считаем, что механизм деятельности нервной системы двухфазный: во время сна...

Неврология Методы лечения Вестник Хирургии Армении им. Г.С. Тамазяна 2.2011
Эндоскопическая диагностика с использованием NBI-технологии у пациентов с хроническим гастритом

Ключевые слова: цифровая видеоэндоскопия, NBI-диагностика, хронические гастриты, кишечная метаплазия, ранняя диагностика

Современная диагностика воспалительно-деструктивных заболеваний верхних отделов пищеварительного тракта основана прежде всего на эндоскопических исследованиях...

Гастроэнтерология, гепатология Медицинский Вестник Эребуни 1.2011 (45)
Интраоперационная цитологическая диагностика опухолевых поражений молочной железы

Анализ литературных данных позволяет выделить группу заболеваний, представляющих наибольшие диагностические трудности при выполнении срочных исследований опухолевых поражений молочной железы...

Онкология Вестник Хирургии Армении им. Г.С. Тамазяна 4.2010
Роль цитологического исследования в интраоперационной диагностике опухолевых заболеваний молочной железы

На протяжении последних десятилетий интраоперационное исследование ткани молочной железы претерпело значительные изменения. В настоящее время это новый тест визуализации...

Онкология Вестник Хирургии Армении им. Г.С. Тамазяна 4.2010
Фетометрические особенности диагностики задержки внутриутробного развития плода (oбзор литературы)

 

Эхография является дополнительным методом диагностики и контроля за аномалиями роста плода, которые являются частой акушерской патологией. Достоверность этого метода основывается во первых на...

Перинатология, акушерство и гинекология Обзоры Вестник Хирургии Армении им. Г.С. Тамазяна 4.2010
Роль пальцевого ректального исследования в диагностике канцера простаты

 

Введение 

Латентный рак предстательной железы (РПЖ) определяется как канцер, не диаг-ностированный in vivo, то есть обнаруженный либо при аутопсии, либо при исследовании материала цистопростатэктомии...

Урология Медицинский Вестник Эребуни 4.2010 (44)

Notice: Undefined index: HTTP_X_FORWARDED_FOR in /sites/med-practic.com/classes/flud_class.php on line 33

САМЫЕ ЧИТАЕМЫЕ СТАТЬИ