В литературе имеются лишь единичные со­обще­ния, рассматривающие состояние им­му­нитета у больных раком предстательной же­лезы (РПЖ), в которых отмечается изменение ряда иммунологических показателей [1,2]. В связи с этим возникает необходимость оценки иммунной системы больных РПЖ для воз­мож­ной ее коррекции. Отрицательное влияние эстрогенотерапии на состояние иммунного статуса больных РПЖ доказано. Имеются сообщения о супрес­сивном действии ци­тоста­тиков, больших доз при радикальной лучевой терапии на по­пул­яции и субпопуляции лим­фоцитов у онкологи­ческих больных.

В настоящее время имеющиеся данные о дифференцировочных антигенах лимфоцитов и их связи с функциональной активностью иммунокомпетентных клеток позволяют оце­нить иммунную систему и выявить целый ряд иммунологических нарушений, связанных с дис­ба­лансом популяций и субпопуляций лим­фо­цитов у онкологических больных. В кли­ни­ческой практике наиболее эффективным и информативным способом является им­муно­фено­типирование лимфоцитов перифери­чес­кой крови с помощью моноклональных анти­тел к дифференцировочным антигенам.

Моно­кло­нальные антитела, получаемые по гибри­дом­ной технологии решили проблему высоко­спе­ци­фичных и стандартных реагентов для ти­пи­рования иммунокомпетентных клеток и в со­четании с методом проточной цитометрии позволяют получать объективную информацию о наличии того или иного маркера на по­вер­ности клеток. Многофакторный анализ ре­зуль­татов иммунофенотипирования позволяет не только определить соотношения эффектор­ных и регуляторных субпопуляций лимфоци­тов, но и косвенно оценить функциональное состояние иммунной системы в целом, что поз­волит проводить адекватную иммунотерапию и повысить эффективность лечения.

Представленная работа является одной из пер­вых по изучению лимфоидных клеток кро­ви у больных РПЖ на основе широкого спектра моноклональных антител (МКА) к диф­ференцировочным антигенам лимфоцитов.

Впервые у больных РПЖ было одно­временно использовано 14 МКА к диф­фе­ренци­ровочным антигенам лим­фо­цитов для их характеристики.

В исследование были включены 73 больных РПЖ. У 23 пациентов иммунофенотип лимфо­цитов определяли до лечения. У больных ло­ка­ли­зованной формой (n=18) иммунологи­ческие исследования проводились после дис­тан­ционной лучевой терапии в суммарной оча­го­вой дозе 66–70 Гр, одновременно в комби­на­ции с антиандрогеном флутамидом (по 250 мг три раза в день) через 30–90 дней после облу­чения. У восьми больных диссеминированным РПЖ эти же исследования проводились после билатеральной орхэктомии (спустя 14–60 дней). У 32 больных РПЖ иммунофенотип рас­сматривался в зависимости от рас­прос­тра­нен­­ности процесса: местно­распростра­ненный (n=16) и диссеминированный (n=16). Кон­тро­лем служили аналогичные исследования, про­веден­ные у здоровых мужчин - доноров. Вли­яние трансуретральной резекции (ТУР) на фено­тип рассматривалось у 21 больного через три–шесть месяцев с момента операции.

Таким образом, фенотип лимфоцитов изу­чали у больных в зависимости от стадии рака (местнораспространенный или диссемини­ро­ван­ный), разных методов лечения без при­ме­не­ния иммунокоррекции и с иммунокор­рекцией, а также у пациентов, перенесших ТУР предстательной железы по поводу выра­женной инфравезикальной обструкции.

Лимфоциты выделяли в градиенте фиколла-верографина. Спектр лимфоцитов периферической крови определяли в реакции непрямой иммунофлюоресценции. В качестве первых антител использовали антитела серии ИКО (ОНЦ МЗРА), направленные к сле­дую­щим дифференцировочным антигенам лим­фо­ци­тов: CDЗ, CD4, CD5, CD7, CD8, CD22, CD25, CD71, НLА-Dг, СD 38, СD45, СDw50, НLА1.

В качестве вторых антител использовали окрашенные ФИТЦ козьи антитела.

Процент антиген-положительных клеток подсчи­тывали в гейте лимфоцитов на ци­то­флюорометре Fascan. Статистическую обра­ботку результатов осуществляли по непара­метри­ческому U - критерию Вилкоксона.

Результаты исследований представлены в табл. 1,2. По сравнению с нормой, у больных местнораспространенной формой РПЖ су­щест­венно снижено как абсолютное коли­чество Т-лимфоцитов (CD3, CD5 и CD7), так и их субпопуляций Т-хелперов (индукторов (CD4) и киллеров) супрессоров (CD8), клеток, несущих активационный антиген CD38, В-лим­­фоцитов (CD 22, НLА -Dг), а также кле­ток, экспрессирующих линейно-неограни­чен­ные антигены (CD50, CD45 и НЬА-1) и анти­ген CD45RА.

Резкое уменьшение количества практически всех популяций и субпопуляций лимфоцитов (исключая уровень CD71- и CD25 -лим­фо­ци­тов, которые в норме присутствуют в мини­маль­ных количествах) позволяет пред­по­ло­жить нарушения дифференцировки лимфо­ид­ных клеток уже на уровне ранних пред­шест­вен­ников.

Сопоставляя уменьшение общего пула лим­фоцитов у больных локализованной формой РПЖ (в 1.5раза) с резким снижением коли­чества популяций и субпопуляций в 1,6–3 раза, а также незначительными отклонениями от нормы их относительных значений, можно сделать заключение об увеличении в перифе­ри­­ческой крови больных РПЖ лимфоцитов, не несущих дифференцировочных антигенов на своих мембранах.

При диссеминации процесса эти нарушения усугубляются: по сравнению с показателями боль­ных с местнораспространенной формой забо­левания достоверно снижено количество Т- лимфоцитов, лимфоцитов, несущих акти­ва­цион­ный антиген CD38, а также общелейкоци­тар­ный антиген CD45, который в норме пред­став­лен на большей части лимфоцитов и играет важную роль в межклеточных взаимо­дейст­виях. Количество лимфоцитов, экспрес­сиру­ющих антигены CD7, CD4, CDЗ у больных диссеминированной формой, не отличается достоверно от таковых значений у больных локализованной формой заболевания, но при сравнении с нормой степень достоверности различий этих показателей выше при дис­семинированном раке.

Как видно из табл. 2, после комбиниро­ван­ного лечения статистически достоверно умень­шается количество CD5- и CD7 -лимфоцитов, CD4 хелперов/индукторов, количество CD25- лимфоцитов, несущих рецепторы к интерлей­кину-2, уменьшается также количество лим­фо­­ци­тов, несущих НLА1-антигены. Видно, что изменения CD45- и CDw50-лимфоцитов, хотя статистически незначимы, носят анало­гич­ный характер.

Сравнительный анализ изменений спектрa лимфоцитов показал, что комбинированное ле­чение оказывает более выраженный им­муно­депрес­сивный эффект нежели кастрация. Тем более, что оно проводилось больным локали­зован­ным раком, у которых первичные из­менения фенотипа лимфоцитов выражены в меньшей степени, чем при диссеминированной форме. Наиболее чувствительными к по­доб­ному воздействию оказались Т-клетки (CD5, CD7), Т-хелперы (CD4), активированные лим­фоциты (CD25), а также лимфоциты, несущие молекулы адгезии.

Подобные изменения наб­лю­даются и в спектре лимфоцитов у больных после кастрации, однако носят менее выра­женный характер и не являются статистически значимыми, исключая резкое уменьшение ко­ли­­чества НLА-Dг - несущих лимфоцитов. Так как снижение количества НLА-Dг лим­фо­ци­тов в равной степени характерно как для кастра­ции, так и для комбинированного ле­че­ния, оно, возможно, связано с анти­ан­дроген­ной направленностью лечения в обеих группах больных.

Таблица 1. Иммунофенотип лимфоцитов у здоровых лиц и больных раком предстательной железы

(местно-распространенного и диссеминированного) (M±m)

Примечание. n–различия достоверны с указанной графой (p<0.05)

Примечание. n–различия достоверны с указанной графой (p<0.05), различия с отсутствием достоверности не указаны (p>0.05)

Таким образом, наши исследования выявляют значительные нарушения иммуно­логи­ческого равновесия среди больных РПЖ, усугубляющиеся после рутинных методов лечения этого заболевания, что свидетель­ствует о необходимости коррекции иммуни­тета у больных РПЖ.

Литература

1. Ibrahim G.K. et al. Differential immunoreactivity of Her-2/neu oncoprotein in prostatic tissues, Surg. Oncol., 1992; 1: 151-155.
2. Brodin G. et al. Increased Smad expression and activation are associated with apoptosis in normal and malignant prostate after cаstration, Cancer Res., 1999; 59: 2731-2738.