Нормальная микрофлора кишечника и верх­них дыхательных путей, адап­тировавша­яся в ходе эволюции к организму человека, игра­ет важную роль в процессе формирования иммунологической реактивности, а также жиз­не­деятельности организма в целом [4-7]. Од­на­ко роль микрофлоры дыхательных путей в этом плане мало изучена. В литературе име­ются немногочисленные сообщения о том, что мик­роб­ный пейзаж слизистых оболочек верх­них дыхательных путей в видовом отношении мно­гообразен, но наиболее постоянным оби­та­те­лем этой области является сапрофитный зеленя­щий стрептокок. Роль этого микроба в верх­них дыхательных путях, по-видимому, ана­логична роли Е.coli в кишечнике [1].

Специфика анатомической структуры мин­да­лин заключается в увеличении площади лим­фо-эпителиального симбиоза, а также в соз­да­нии условий для систематического и длитель­ного контакта микроорганизмов с лимфоидными клетками, которые мигрируют в субэндотелиальную ткань, эпителиальные хо­ды и просвет лакун. По-видимому, эволюцион­ная мотивация крипт миндалин заключается именно в том, чтобы способствовать массивно­му контакту иммунокомпетентных клеток с микро­бами [2,3]. В результате такого контакта осуществляется клонирование лимфоидных кле­­ток, стимуляция пролиферации и диф­фе­ренци­ровка лимфоцитов, формирование им­муно­логической памяти и репопуляция ком­ми­тированных иммунокомпетентных кле­ток в другие лимфоидные органы.

Исходя из вышеизложенного, мы задались целью изучить особенности гуморального и кле­точного иммунного ответа у больных с тон­зил­литом в зависимости от микрофлоры рото­глот­ки.

Материал и методы исследования. Под на­шим наблюдением находились 49 больных хроническим тонзиллитом. Возраст колебался в пределах от 7 до 40 лет. В зависимости от наличия патогенной микрофлоры в верхних ды­хательных путях больные распределены на следующие группы:

1. Больные с хроническим тонзиллитом с со­пут­ству­ющими острыми и хроническими рес­пираторными заболеваниями (29 боль­ных);
2. Боль­ные с хроническим тонзиллитом с нор­маль­ной микрофлорой ротоглотки (20 боль­ных).

Контрольную группу составили 10 прак­ти­чес­ки здоровых лиц. У всех больных при пос­туп­лении мы изучали клеточные и гумораль­ные показатели иммунитета с использованием мононуклеарной функции клеток и плазмы периферической крови. Относительное содер­жа­ние CD2+ Т- и CD19+ В-лимфоцитов было ис­следо­вано методом иммуномагнитной се­па­ра­ции. Сущность метода состоит в смешивании с цельной кровью магнитных микрочастиц (Dynabeads® M-450, Dynal), нагруженных моноклональными анти-CD2 или анти-CD19 антителами против пула Т- или В-клеток с последующей сепарацией клеток с помощью специальной магнитной рамки. Фагоцитарную активность (ФА) нейтрофилов определяли по способности клеток поглощать фиксирование формалином Staphylococcus aureus штамма ИНМИА 5233.

Гемолитический титр ком­п­ле­мен­та в плазме крови больных определяли по 50% гемолизу (СН50) эритроцитов барана, в присутствии антиэритроцитарной сыворотки кролика. Функциональную активность лимфо­ци­тов периферической крови больных оп­ре­деля­ли по реакции бласттрансформации лим­фо­цитов (РБТЛ) с использованием фито­гемаг­глю­тамина (ФГА-М, Sigma) в качестве поли­клональ­ного активатора лимфоцитов человека. РБТЛ проводили в среде RPMI-1640 (Sigma), содержащей 2мМ глютамина, 1мМ пирувата натрия, 50мкг/мл гентамицина и 10% эмбри­ональ­ной телячьей сыворотки. Лимфоциты пе­ри­ферической крови больных в концентрации 2,5-3,5 106 в 1мл были культивированы в присутствии 20мг/мл ФГА-М в течение 72ч при 370С. По окончании инкубации клетки фик­­си­ровали смесью метанол-уксусная кис­лота (3:1) и окрашивали по Романовскому-Гимза. В микроскопических препаратах опре­дел­яли относительное содержание бластных лим­фоцитов. Содержание IgG, IgM и IgA в сы­воротке периферической крови определяли иммунотурбидиметрическим методом.

Бактериологические исследования испра­жнений проводились по методике, обеспечи­ваю­щей возможность выделения любого пред­ста­вителя патогенных и условнопатогенных кишечных бактерий. Посев материала прово­дился параллельно на нескольких средах, та­ких как среда Эндо, среда Пласкирева, висмут-сульфатный агар, кровяной агар, желточно-солевой агар (ЖСА) и сахарный агар. Каждая из этих сред способствовала вы­де­лению того или иного возбудителя, а также поз­волила проводить качественные и коли­чествен­ные определения колоний микро­орга­низ­ма. После проведения откола на ско­шен­ный агар с мочевиной, учитывая фермен­та­тив­ные свойства микробов в соответствии с изме­нением цвета индикатора, дифференцировали колонии микроорганизмов. При серологи­чес­кой идентификации использовались реакции агглютинации на стекле с соответствующими антигенами, развернутая реакция Видаля и иммуноферментный анализ специфических ан­ти­тел к вирусу простого герпеса (HSV) и цитомегаловирусу (CMV).

Результаты и обсуждение. Результаты про­веденных нами исследований по изучению кле­точных и гуморальных показателей им­муни­тета в первой группе больных в зави­си­мости от возбудителя острой или хронической респираторной инфекции отражены в табл. 1. Как видно из представленных данных, у всех обследованных больных этой группы, за ис­ключением больных, имеющих Staphylococ­cus epidermitis, наблюдается снижение актив­ности фагоцитоза нейтрофилов, интенсивности бласттрансформации лимфоцитов в культуре, а также обнаруживается увеличение содер­жа­ния CD19++ В-клеток и уровня сывороточных иммуноглобулинов класса IgG и IgM, а также снижение актив­ности фагоцитоза нейтрофилов и интенсив­ности бласттрансформации лимфоцитов в куль­туре обнаруживаются у больных, име­ющих Staphylococcus aureus. Снижение гемо­ли­ти­ческой активности системы комплемента не наблюдалось у больных с хроническим тон­зил­­литом с сопутствующими острыми и хроническими респираторными забо­левани­ями. Из представленных в табл. 1 данных сле­дует также, что содержание CD2+ Т-клеток дос­товерно снижается лишь у больных, имею­щих Candida albicans в ротоглотке. В-клеток и уровня сывороточных им­муноглобулинов класса IgG и IgM. Увеличение содержания IgA, CD19

Как следует из результатов, пред­став­лен­ных в табл. 1, нарушение иммунитета наблю­да­ется у больных с высокими титрами антител клас­са IgG к HSV и CMV. Так, почти вдвое умень­шается количество CD2+ Т-клеток и бластных форм клеток при их стимуляции in vitro ФГА, а количество CD19+ В-клеток и уро­вень сывороточных иммуноглобулинов, наоборот, увеличиваются примерно в два раза по отношению к контрольным показателям (табл. 1).

Таблица 1

Клеточные и гуморальные показатели иммунитета у больных с острыми или хроническими респираторными заболеваниями в зависимости от возбудителя инфекции

 Примечание. *Pt или Py(0,05 при сравнении средних значений с контрольной группой практически здоровых лиц

В табл. 2 представлены данные по изучению гуморальных и клеточных показателей им­муни­тета у больных с хроническим тонзил­ли­том без респираторных заболеваний дыхатель­ных путей. Как следует из результатов, представ­лен­ных в табл. 2, содержание CD2+ Т-клеток и CD19+ В-лимфоцитов, а также активность фагоцитоза и реакции бласттранс­фор­мации Т-лимфоцитов в культуре дос­то­верно не отличаются от таковых у прак­ти­чески здоровых больных. В то же время со­дер­жание IgG, IgM, IgA в сыворотке дос­то­верно повышается (табл. 2).

Таблица 2

Показатели иммунологической реактивности у больных с хроническим

тонзиллитом без респираторных заболеваний

Среди лимфоидных органов небные минда­ли­ны в филогенетическом отношении на­и­более поздние образования [2]. Своей мор­фоло­гической структурой они отличаются от других лимфоидных органов тем, что в их строении сочетаются признаки как первичных, так и вторичных лимфоидных органов. При­чем многочисленные исследования свидетель­ству­ют о том, что небные миндалины главным образом участвуют в индукции и регуляции гу­мораль­ного иммунитета [1]. В свете современ­ных представлений о роли миндалин в фор­миро­вании иммунитета и в общей жиз­не­дея­тель­ности организма можно утверждать, что биологическая система миндалин – лакуна с ее микробным содержимым, лакунарный эпи­те­лий и лимфоидная ткань являются тем местом, где на протяжении всего онтогенеза осущест­вля­ется информационное обеспечение лимфо­и­д­ной ткани о микробных антигенах, содер­жа­щихся на слизистой оболочке переднего отдела пищеварительного и дыхательного трактов [3]. Путем постоянных контактов внутриэпите­ли­аль­­ных лимфоцитов с микро­бами в миндали­нах реализуются также важные иммунологи­чес­кие процессы (клонирование антигенспеци­фи­ческих лимфоцитов, формиро­вание им­муно­логической памяти, репопуляция анти­генспеци­фических клеток-эффекторов в дру­гие лимфоидные органы), которые имеют ог­ром­ное значение для сохранения и изменения ак­туаль­ного репертуара специфич­но­го гу­мораль­ного иммунного ответа пище­варитель­­ного и дыхательного трактов.

Литература

1. Вершигора А.Е., Веременко К.Н., Визиренко Л.В. Иммунобиология небных миндалин. Киев, 1978.
2. Давтян Т. К., Геворкян Г.А., Погосян Д.А. Эволюция интегративной функции иммунной системы. 1. Эволюционное развитие иммунной системы. Успехи современной биологии. 2005, т. 125, 1, с. 34-40.
3. Давтян Т. К., Геворкян Г.А., Погосян Д.А. Эволюция интегративной функции иммунной системы. 2. Молекулярная эволюция антиген-распознающих рецепторов. Успехи современ­ной биологии. 2005, т. 125, 2, с. 151-157.
4. Hooper L.V., Gordon J.I. Commensal host-bacterial relationships in the gut, Science, 2001, Vol. 292, p. 1115-1118.
5. Levin B.R., Antia R. Why we don’t get sick: The within-host population dynamics of bacte­rial infections, Science, 2001, Vol. 292, p. 1112-1115.
6. Ouwehand A.C., Salminen S., Arvola T., Ruuska T., Isolaur E. Microbiota composition of the intestinal mucosa: Association with fecal microbiota, Microbiol., Immunol., 2004, Vol.48, p. 497-500.
7. Tannock G.W. Molecular assessment of intesti­nal microflora, Am. J. Clin. Nutr., 2001, Vol.73, p. 410S-414S.