Влияние кардиоактивного белок-гормонального комплекса гипоталамуса на гемостаз (Экспериментальная и профилактическая медицина)

Ключевые слова: нейрогормон, кардиотропный, гипоталамус, толерантность,  фибринолитическая активность, коагуляция

Гипоталамо-нейрогипофизарная система является узловым центром нейрогуморальной регуляции и свои многогранные функции она осуществляет с помощью нейромедиаторов и нейрогормонов, образуемых в нейросекреторных ядрах гипоталамуса. На протяжении более четырех десятков лет нами изучается широкий спектр функциональных возможностей семьи гипоталамических белок-гормональных комплексов (БГК), являющихся биохимическими системами, способными осуществлять нейрогормональную регуляцию функций мозга и ряда висцеральных органов, в особенности сердца [8,14].

Результаты наших ранее проведенных исследований явились объективным подтверждением высокой активности физиологического действия БГК, регулирующих вазодилатацию, кровоток миокарда, лимфоток и центральную гемодинамику [4]. Согласно воспроизводящим данным, БГК играют значимую роль не только в кардиоваскулярной системе, в репарации некротической зоны миокарда, но и в способности к адаптации организма в целом. Так, установлена протекторная роль, подтверждающая их принадлежность к новому классу мозговых нейротропинов, предотвращающих развитие деструктивных процессов в крови и тканях [5]. Одновре-менно, на уровне указанных факторов, осуществляется связь между иммунной, нервной и эндокринной системами [16]. Как известно, в сложном процессе свертывания участвует взаимодействие трех звеньев гемостаза: клеточных, плазменных факторов и компонентов сосудистой стенки [6]. Регуляция этого процесса осуществляется как непосредственным влиянием на органы, синтезирующие факторы свертывания крови и компоненты фибринолитической системы, так и через эндокринную систему – гипоталамус, гипофиз и надпочечники[1].

Цель настоящей работы – развитие гипотезы о том, что БГК являются специфическими факторами в отношении системы гемостаза, функциональное нарушение которого, как известно, является основой возникновения многих патологических процессов. Ранее полученные данные [15] об ингибиторном действии одного из искомых факторов, белок – нейрогормон "С" (БНС) комплекса на АДФ - индуцированную агрегацию тромбоцитов в плазме крови в условиях in vitro, а также сокращение тромбинового времени in vivo после его введения позволяли предположить, что подобные сосудистые реакции, возникшие под его действием, могут иметь место и в целом организме. Последнее диктовало необходимость изучения их в регуляции гемостаза. Учитывая определенные структурные различия между БГК, представляло определенный интерес проведение анализа и сравнение влияния кардиоактивных БГК гипоталамуса, в частности белок – нейрогормон "Г" (БНГ) комплекса, с ранее изученным БНС на отдельные показатели системы гемостаза.

Материал и методы

Эксперименты проведены на белых беспородных крысах-самцах, массой 180-200г; электрофоретически гомогенный препарат БНГ, полученный по разработанной нами схеме [4], вводили в яремную вену, в качестве контроля использовали равный объем 0,85% раствора NaCl. Кровь для анализа из яремной вены брали через 30 и 60мин с 3,8% раствором цитрата Na (соотношение кровь : консервант – 9:1).

В плазме крови определяли следующие биохимические показатели: время свертывания крови [11] и рекальцификации плазмы [7], толерантность к гепарину [13], активность факторов протромбинового комплекса [12] с использованием лиофилизированного тромбопластина фирмы Delta THR-stb, тромбиновое время, фибринолитическую активность и концентрацию фибриногена [2].

Сравнение контрольных и опытных независимых выборок производили по непараметрическому критерию Манна-Уитни U. Различия между выборками считали значимыми при р‹ 0,05.

Результаты и обсуждение

Как известно, жидкое состояние крови обеспечивается динамическим взаимодействием прокоагулянтных, антикоагулянтных и фибринолитических реакций. Результатом этого взаимодействия является свертываемость цельной крови, позволяющая оценить ее состояние в целом. Исследование изменения этого показателя под действием БНГ было проведено на интактных белых крысах в условиях in vivo. Полученные данные свидетельствовали о выраженном ускорении свертывания крови на 29,7%, при этом степень выраженности свертывания зависит от введенной дозы, увеличение которой приводит к соответствующему нарастанию эффекта (рис.1,A).

Рис.1.  Изменение показателей гемокоагуляции интактных крыс до и после введения БНГ:  А – время свертывания, сек;  Б – время рекальцификации, сек;В – протромбиновое время, сек.

 Различия между выборками значимы при р‹0,05

При достижении максимального увеличения времени свертывания дальнейшее повышение дозы более 10мкг приводило к обратному эффекту, что свидетельствовало о существовании предела ускорения гемокоагуляции. Следует отметить наличие параллелизма между временем свертывания и показателями свертывания крови: так время рекальцификации уменьшается через 30 мин после введения БНГ на 56,9% и сохраняется к 60-й мин (рис.1,Б). Протромбиновое время, наоборот, увеличивается при введении 10мкг БНГ по сравнению с контрольным уровнем на 41,3% (рис.1,В). Однако уменьшение введенной дозы сокращает отмеченный показатель на 23%. В целом, полученные данные свидетельствовали о гиперкоагуляционных сдвигах некоторых показателей свертывания крови (табл.1) и послужили основанием для проведения специальной серии экспериментов на предмет изучения влияния БНГ на функциональное состояние противосвертывающей системы (ПСС). Имеющиеся в литературе данные позволяют предположить, что ускорение свертывания крови может быть обусловлено не только увеличением факторов, стимулирующих коагуляцию, но и уменьшением веществ, тормозящих ее [3].

 Таблица 1

 Изменение показателей гемокоагуляции интактных крыс

 до и после введения БНГ

В качестве характерных показателей состояния ПСС принимались изменения антикоагулянтной и фибринолитической активности крови, определение которых проводилось также в цитратной плазме крыс. Как показали результаты исследования (табл.2), введение БНГ интактным крысам сопровождается изменением функционального состояния ПСС, что выражается в сдвигах показателей как антикоагулянтного, так и фибрино-литического звена гемостаза.

 Таблица 2

 Влияние БНГ на антикоагулянтную и фибринолитическую

 активность крови крыс

Рис.2.  Влияние БНГ на антикоагулянтную и фибринолитическую активность крови крыс:  А – концентрация фибриногена, мг%;  Б – фибринолитическая активность, мин;  В – толерантность плазмы к гепарину, мин; Г – тромбиновое время, сек. Различия между выборками значимы при р‹0,05

Понижение толерантности плазмы к гепарину составляет в среднем 30,5% (рис.2, В), приблизительно такой же результат – уменьшение тромбинового времени на 29% – выявляется через 60 мин после введения БНГ (рис. 2, Г). Наряду с этим в фибринолитическом звене отмечаются разнонаправленные изменения. Так, выявлено понижение фибринолитической активности (ФА) после введения БНГ на 26,6% и одновременно–максимальное увеличение концентрации фибриногена на 132,6% по сравнению с контрольным уровнем (рис.2, Б,А). Этот факт можно объяснить уменьшением в крови концентрации плазминогена и его активаторов, о чем свидетельствует понижение ФА эуглобулиновой фракции плазмы, которая отражает в основном состояние внутреннего механизма активации фибринолиза и свидетельствует об отсутствии большей части ингибиторов фиб-ринолиза [1,10]. Кратковременное увеличение фибриногена рассматривается как защитная реакция организма, что согласуется с литературными данными [3] о возможности образования фибриногена при нарушении деятельности противосвертывающей системы. Сокращение тромбинового времени указывает на некоторое увеличение содержания тромбина и свидетельствует о способности БНГ снижать активность ингибитора тромбина, что также ведет к ускорению гемокоагуляции.

Таким образом, БНГ дозозависимо ускоряет гемокоагуляцию, но при этом параллельно имеет место активация системы противодействия свертыванию крови [9]. Учитывая тесную связь между нарушением кровотока и состоянием активности структур мозга, можно объяснить специфическую направленность воздействия кардиотропного БНГ на  сосудистую систему, а также его участие в предотвращении развития деструктивных процессов в крови и тканях [5,16].

Литература

1. Андреенко Т.В. Фибринолиз. Биохимия животных и человека. М., 1982, 6, с.84-94.
2. Андреенко Г.В. Методы исследования фибринолитической системы крови. Изд.-во МГУ, 1981.
3. Луговский Э.В. Молекулярные механизмы образования фибрина и фибринолиза. Киев, 2003.
4. Срапионян Р.М. Нейроспецифические белок-гормональные комплексы. Успехи физиологических наук, 1996, т.27, 1, с.21-31.
5. Чавушян В.А., Срапионян Р.М., Паронян З.Х. и др. Протекторный эффект кардиоактивных гипоталамических белок-гормональных комплексов "С" и "Г" при повреждении периферических нервов. Информ. технологии и менеджмент, 2004, 2, с.218-230.
6. Boot N., Bennet B. A newlife-long hemorrahagic disorder due to excess plasminogen activation. Amer. J. Hematol., 1999, 4, p.289-294.
7. Bogerhot H. Roka L. Gerinnungsphyslogische Untersuchungen bel hamarrhagischen Diathesen, Leltschr. Vitamin-Hormon u. Fermentforschr., 1954, Bd.6, 1, S.25-39.
8. Galoyan A.A., Srapionian R.M. Protein-hormonal complexes in the hypothalamus as neurochemical system of regulation. Neurochem. Res., 1983, v.8,  12, p.1511-1535.
9. Galoyan A.A., Srapionian R.M., Goggin M.N. et al. The hypothalamic and atrial coronary-dilatory hormones in the mechanisms of blood coagulation. Neurokhimiya, 2006, v.23, p.244-253.
10. Jesty J. Dissociation of complexes and their derivatives formed during inhibition of bovine thrombin and activated Factor X by antithrombin III. J. Biol. Chem., 1979, 254, p.1044-1049.
11. Lee R., White P.D. Clinical study of the coagulation time of blood. Amer. J. Med., 1973, VCXLV, 4,p.495-503.
12. Quick A. On constitution of prothrombin. Am. J. Physiol., 1943, 2, 140, p.212-223.
13. Sigg B. Der Mikroheparintest, Klin. Wschr., 1952,9/10, S.205-206.
14. Srapionian R.M. Neurosecretory hypothalamus is a source of organotropic neurohormones and immunomodulators, Neurokhimya, 2002, 19, p.157-160.
15. R.M. Srapionian, Paronian Z.Ch., Abelian J.G., Sahakian F.M., Galoyan A.A.. Role of cardiotropic protein-hormonal complexes in the regulation of hemostasis. Neurochemical Journal, 2008, v.25, 4. p.321-322.
16. Srapionian R.M., Galoyan A.A. Cardioactive protein-hormonal complexes of brain and heart. Neurochem. Res., 2010, V.35,  6, p.912-916. 

Вопросы, ответы, комментарии