Изменение показателей мембранной функции при физиологически протекающей беременности и беременности, осложненной инфицированием цитомегалией

Цель исследования: Изучение состояния мембранной функции при беременности, осложненной инфицированием цитомегалией.

Материал и методы исследования: Обследовано 163 беременных женщин, которые были разделены на следующие группы: контрольную группу, которую составили женщины с физиологически протекающей беременностью и группу беременных с наличием цитомегаловирусного инфицирования. О структурно-функциональном состоянии биомембран судили по уровню средних молекул, суммарной пероксидазной активности, активности гистидазы и уроканиназы в плазме крови.

Результаты исследования: Изучение мембранной функции при беременности с цитомегаловирус (ЦМВ) показало значительное повышение их проницаемости при высоких титрах антител на всем протяжении беременности и ,особенно, в третьем триместре. Отмеченная особенность свидетельствует о возрастании нагрузки на печень как при физиологической беременности, так и в большей степени на фоне цитомегаловирусного инфицирования.

Заключение: Окислительный стресс, развивающийся при беременности с цитомегаловирусным инфицированием, приводит к нарушению структуры и функции различных клеточных мембран с резким повышении мембранной проницаемости.

Ключевые слова: цитомегаловирусная инфекция у беременных, суммарная пероксидазная активность, гистидаза, уроканиназа

Цитомегаловирус (ЦМВ) является наиболее распространенным вирусом, передающимся плоду во внутриутробном периоде [10, 12, 15, 16].

Так, каждый год в Соединенных Штатах регистрируется приблизительно 40000 детей с врожденной цитомегаловирусной инфекцией (ЦМВИ), из которых в 400 случаев отмечены смертельные исходы, а 8000 детей страдают нарушениями
слуховой и зрительной функции, задержкой умственного развития [13].

Механизм повреждающего действия вирусов на клетки связывают с развитием тканевой гипоксии [7, 9, 11] и, как следствие, нарушениями окислительного фосфорилирования в митохондриях [3].

Превращение молекул в химических и биохимических процессах организма часто происходят в несколько стадий через образование лабильных молекулярных продуктов – свободных радикалов. Многие реакции с их участием протекают с энергией активации. Реакции такого типа – реакции окисления.

Особую роль в окислительном повреждении клеток играют свободные радикалы, которые индуцируют реакции перекисного окисления липидов (ПОЛ) – физиологический многоступенчатый процесс, протекающий в липидном бислое клеточных мембран и регулирующий их структуры и функции, активность мембраносвязанных ферментов и направленность метаболизма
[4, 5].

Продукты ПОЛ в малых концентрациях необходимы для регуляции клеточных мембран [1].

Как показали исследования Л.М. Агаджановой (1999) как физиологическая беременность, так и беременность на фоне урогенитальной инфекции сопровождаются ростом ПОЛ, что оказывает влияние на проницаемость клеточных мембран [2].

Однако, характер изменений проницаемости клеточных мембран при беременности на фоне инфицирования вирусом цитомегалии не изучен до настоящего времени.

Цель исследования

Целью нашего исследования явилась изучениесостояния мембранной функции при беременности, осложненной инфицированием цитомегалией

Материал и методы исследования

Обследовано 163 беременных женщин, которые были разделены на следующие группы: контрольную группу, которую составили женщины с физиологически протекающей беременностью и группу беременных с наличием цитомегаловирусного инфицирования. Последняя в зависимости от тира антител к вирусу цитомегалии была разделена на подгруппы: с
титром 1:8, 1:16, 1:32 и выше. Структурнофункциональное состояние биомембран оценивалось в первом, втором и третьем триместрах.

Предполагаемый срок гестации рассчитывали с помощью формулы Негле. Для определения ранних сроков беременности использовали количественный и качественный способы. Количественная методика заключалась в планиметрической
обработке эхокартины с пересчетом линейных (мм) и объемных (мл) единиц в срок беременности.

Диагностику цитомегаловируса проводили с использованием: иммуноферментного анализа, метода прямой  ммунофлюоресценции (ПИФ), метода непрямой микроиммунофлюоресценции, реакции непрямой гемагглютинации.

Для исследования использовалась кровь из локтевой вены беременных женщин. Кровь стабилизировалась 1,5% раствором оксалата натрия (9:1). О структурно-функциональном состоянии биомембран судили по уровню средних молекул,
суммарной пероксидазной активности, активности гистидазы и уроканиназы в плазме крови.

Мембраны эритроцитов выделяли по методу Limber. Принцип метода определения суммарной пероксидазной активности (СПА) в плазме крови заключается в способности гемопротеинов в присутствии перекиси водорода катализировать окисление бензидина с образованием окрашенных продуктов (Покровский А.А., 1969). Величину оптической плотности определяли при 600 нм в течение 3-4 минут до стабилизации голубой окраски, результаты выражали в единицах оптической
плотности на 1 мл плазмы крови.

Определение средних молекул в плазме крови проводили по Владыка А.С. и соавт. (1986). Количество средних молекул выражали в условных единицах, численно равных показаниям экстиниции.

Определение активности гистидазы и уроканиназы в плазме крови проводилась по Таболину В.А. и соавт. (1977). Измерение проводили при 280 нм против контроля. Активность гистидазы выражали в мкМ уроканиновой кислоты на 1 литр плазмы в минуту. Экстиницию супернатанта определяли при 267 нм, каждый контроль против своего опыта. Активность уроканиназы выражали в мкМ уроканиновой кислоты в минуту на литр плазмы.

Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в плазме крови и эритроцитах определялась спектрофотометрически по увеличению интенсивности поглощения при 340 нм (максимум поглощения для НАДФН) за первые 5 минут инкубации при комнатной температуре (Glock, McLean, 1963). Активность фермента выражали в нМ НАДФН на 1 мл плазмы (или мг белка
гемолизата) в 1 минуту.

Результаты исследования и обсуждение

Мембранная проницаемость, являющаяся интегральной функцией клеток, изучена нами на основании определения активности маркерных мембранных ферментов в крови. Данные о характере изменений показателей мембранной функции при физиологически протекающей беременности и беременности, осложненной инфицированием цитомегалией, приведены в
таблице 1. Как видно, при физиологически протекающей беременности активность СМ (средние молекулы) во всех триместрах значительных изменений не претерпевает. Аналогичная картина отмечена и при беременности, осложненной
инфицированием ЦМВ независимо от титра антител.

Активность СПА (суммарная пероксидазная активность) на протяжении физиологической беременности и беременности с ЦМВ имела тенденцию к возрастанию, однако достоверных изменений нами не установлено (p>0,05). Иная картина наблюдается при сравнении показателей в зависимости от титра антител. Так, уже при титре антител 1:16 СПА более чем в
3 раза превышала таковую при физиологически протекающей беременности на соответствующих сроках гестации. Более выраженный характер отмеченная особенность приобретает при титре антител 1:32. СПА на фоне цитомегаловирусного
инфицирования возрастает в 8 раз, а в III триместре повышается с 1,42±0,14 ед/мл до 13,60±1,27 ед/мл, т.е. в 9 раз. Активность гистидазы как при нормальной беременности, так и при наличии цитомегаловирусного инфицирования, сохранялась практически на одном уровне и не зависила от срока гестации и титра антител. Что касается уроканиназы,
то ее активность при физиологической беременности возрастает во II и III триместрах практически в 2 раза по сравнению с таковой в I триместре.

Данная особенность сохраняется и при наличии  цитомегаловирусного инфицирования, причем при титре антител 1:32 возрастание активности фермента наиболее выражено: 0,173±0,01 мкМ/л в III триместре против 0,07±0,008 мкМ/л в I триместре, т.е. в 2,47 раз. Следует подчеркнуть, что при высоких титрах антител активность уроканиназы достоверно
превышает таковую при физиологически протекающей беременности на протяжении всех триместров (p<0,05).

Активность ГДГ (глюкозо-6-дегидрогеназа плазмы) как при физиологической беременности, так и на фоне  цитомегаловирусного инфицирования, с возрастанием гестационного срока достоверных изменений не претерпевает,
не зависит она также и от титра антител.

Пероксидазной активностью обладает комплекс гемоглобина с α-гликопротеином плазмы крови гаптоглобином. Комплекс образуется в результате внутрисосудистого гемолиза эритроцитов или повышения проницаемости эритроцитарных
мембран и выхода гемоглобина в плазму. Повышение уровня СПА в плазме крови указывает на изменение проницаемости
эритроцитарных мембран. Повышение уроканиназной активности указывает на нарушение мембранной функции гепатоцитов.

Изучение ПОЛ при физиологически протекающей беременности позволило нам установить его повышение. В указанных условиях состояние клеточных мембран характеризуется значительным ростом активности уроканиназы. Уровень уроканиназы, являющейся гепатоспецифическим ферментом, резко возрастает.

Как известно, уроканиназа является маркером структурно-функционального состояния мембран гепатоцитов. Полученные данные подтверждают аналогичность этиопатогенеза нарушений мембранной функции у всех исследуемых групп.

Изучение мембранной функции при беременности с ЦМВ показало значительное повышение их проницаемости при высоких титрах антител на всем протяжении беременности и, особенно, в третьем триместре. Отмеченная особенность свидетельствует о возрастании нагрузки на печень как при физиологической беременности, так и в большей степени на фоне
цитомегаловирусного инфицирования.

Заключение

Таким образом, при физиологически протекающей беременности проницаемость клеточных мембран претерпевает определенные изменения, а при наличии цитомегаловирусного инфицирования изменения носят более выраженный
характер. Окислительный стресс, развивающийся при беременности с цитомегаловирусным инфицированием, приводит к нарушению структуры и функции различных клеточных мембран, выражающемуся в резком повышении мембранной проницаемости.

Литература

1. Абрамченко В.В., Костюшов Е.В., Щербина Л.А. Антиоксидантыи антигипоксанты в акушерстве. - С.-Петербург: Логос,1995. - 120 с.
2. Агаджанова Л.М. Перекисное окисление липидов, антиоксидантный статус в системе мать-новорожденный при физиологическойбеременности и беременности с урогенитальнойинфекцией в анамнезе: Автореф. дис. … к-та мед. наук. - Ереван,1999.- 20 с.
3. Блюгер А.Ф., Майоре А.Я. Биологическая мембрана - основнаяструктура организации жизнедеятельности клетки // Биологические мембраны и патология клетки. - Рига, 1986.- С. 5-10.
4. Болдырев А.А., Куклей М.Л. Свободные радикалы в нормальном и ишемизированном мозге // Нейрохимия. - 1996. -Т. 13, N 4. - С. 271-278.
5. Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г. Перекисное окисление мембра и природные антиоксиданты. // Успехи химии. - 1985. - Т.4. - N 9. - с. 1540-1558.
6. Бурлакова Е.Б., Крашаков С.А., Храпова Н.Г. Роль токоферола в пероксидном окислении липидов мембран. // Биол. Мембраны. - 1998. - Т. 15. - N 2. - с. 137-167.
7. Войтенко И.И., Гранитов В.М., Бобровский Е.А. Интоксикационный синдром и изменение некоторых свойств эритроцитов у больных вирусными гепатитами// Третий Всероссийский съездинфекционистов. - М.-Смоленск, 1989. - С. 153-155.
8. Денисов Е.Т. Константы скорости гомологических жидкофазныхреакций // М.- Наука. - 1971. - 711 с.
9. Мартынов В.А., Козловцев М.И., Колобаева О.В. Метаболизмэритроцитов и состояние иммунитета у больных вирусными гепатитами // Актуальные вопросы инфекционнойпатологии. - Иркутск, 1993. - Ч.1. - С. 92-93.

1.  Савельева Г.М. Справочник по акушерству, гинекологии иперинатологии. М.: ООО "Медицинское информационное агенство" 2006. - 2006.
   Ambrosio G., Weisfeldt M.L., Jacobus W.E., Flaherty J.T. Evidence for a reversible oxygen radical mediated component of
   reperfusion injury: reduction by recombinant human superoxide dismutese administered at the time of reflow // Circulation. - 1987.
   - V. 75. - P. 282-291.
   Arav-Boger R., Battaglia C.A., Lazzarotto T. et al. Cytomegalovirus(CMV)-encoded UL144 (truncated tumor necrosis
   factor receptor) and outcome of congenital CMV infection. // J.Infect. Dis. - 2006. - Vol.194, N4. - P. 464-473.
   Cannon M.J., Davis K.F. Washing our hands of the congenitalcytomegalovirus disease epidemic. // BMC Public. Health. - 2005.
   - N5. - P.70.
   Esterbauer H. Citotoxidation and genotoxication of lipid oxidation products // Amer.J/ Clin. Nutr. - 1993. - Vol. 57. Suppl. - p.
   7795-7865.
   Halwachs-Baumann G. The congenital cytomegalovirus infection: virus-host interaction for defense and transmission. Curr. Pharm.Biotechnol. - 2006. - Vol.7, N4. - P.303-312.
   Staras S.A., Dollard S.C., Radford K.W. et al. Seroprevalence ofcytomegalovirus infection in the United States, 1988-1994. // Clin.Infect. Dis. - 2006. - Vol.43, N9. - P. 1143-1151.

Вопросы, ответы, комментарии