Иммуногистохимия сегодня в Ереване: Центр медицинской генетики и первичной охраны здоровья

С 2002 года в Центре Медицинской Генетики функционирует лаборатория иммуногистохимии, оснащенная современным обрудованием и реагентами компании DAKO (Дания) – одним из признанных мировых лидеров в производстве реагентов и оборудования в области иммуногисто- и иммуноцитохимии.

Наша лаборатория работает в тесном сотрудничестве с Национальным онкологическим центром им. В.А. Фанарджяна. В последние годы наше сотрудничество с онкологами и патогистологами Армении значительно укрепилось и расширилось, т.к. все больше осознается важная роль иммуногистохимии среди различных методов диагностики в онкологии.

Что нам дают иммуногостохимические исследования сегодня?

Иммуногистохимия  - метод идентификации и определения локализации в клетке и тканях различных структур, имеющих антигенные свойства. Это одна из современных методик дифференциальной диагностики онкологических заболеваний.

Это метод морфологической диагностики, в основе которого лежит визуализация и оценка с помощью микроскопа результатов реакции антиген-антитело в срезах ткани, то есть иммунологические реакции “переносятся” на предметное стекло морфолога.

Одним из несомненных достоинств метода является возможность проведения ретроспективного исследования, можно работать с архивным материалом – парафиновыми блоками, даже через 5-6 лет после оперативного вмешательства.

Иммуногистохимическое окрашивание позволяет:

• определить принадлежность рецепторов именно опухолевым клеткам, что практически невозможно при использовании биохимических методов определения рецепторного статуса опухолей (радиолигандный, иммуноферментный методы).
• В 95% наблюдений удается достоверно определить фенотип опухоли.

Иммуногистохимическое окрашивание в условиях полного сохранения морфологических деталей предоставляет уникальный материал для оценки биологического потенциала опухолевых клеток:

• темп роста,
• прогноз течения опухолевого процесса,
• реакция данного, конкретного больного на лечение (химиотерапия, гормональные препараты), т.е. помощь в выборе наиболее оптимальной терапии
• возможность обнаружения микрометастаз до того, как они могут быть выявлены иными методами диагностики.

В настоящее время в нашей лаборатории проводятся следующие, наиболее важные и информативные для диагностики, прогноза и лечения, виды исследований:

• определение эстрогеновых, прогестероновых и андрогеновых рецепторов
• HER2/neu рецептора
• HER1 (эпидермального фактора роста)
• онкобелка Bcl2
• онкобелка S100A4
• цитокератинов A1/A3.

Иммуногистохимический метод имеет широкие возможности и перспективы, т.к. позволяет исследовать практически все виды тканей. Рак молочной железы находится на первом месте среди злокачественных заболеваний у женщин и является основной причиной их смерти в возрасте от 40 до 55 лет. Опухоли молочной железы во все времена были и остаются большой проблемой для онкологов. Ученые и врачи пытаются с помощью новых методик лечения, новых подходов, новых препаратов найти оптимальный способ воздействия на болезнь. Однако необходимо четко представлять себе место каждого препарата в разработанных планах лечения больных в любой стадии заболевания и в любом возрасте.

Во всем мире ведутся поиски наиболее эффективных методов лечения и достигнуты немалые успехи в разработке стандартных схем терапии РМЖ. Прежде всего они базируются на точной диагностике РМЖ с применением иммуногистохимических методов. Иммуногистохимия – одна из наиболее молодых, но быстро развивающихся областей гистопатологии, что в значительной степени обусловлено  современными достижениями иммунологии, молекулярной биологии, биотехнологии и генетики.

Благодаря успехам биохимии и молекулярной биологии, в настоящее время в арсенале исследователей и клиницистов имеется огромное количество биологически значимых показателей, которые могут помочь в прогнозе раннего рака молочной железы (РМЖ) и выборе адъювантной терапии при распространенном процессе.

Количество показателей, рассматривающихся в качестве потенциальных молекулярных маркеров, увеличивается лавинообразно, отражая достижения и находки в области изучения механизмов регуляции пролиферации и дифференцировки опухолевых клеток. В их число входят онкогены и протоонкогены, онкобелки, различные факторы роста и их рецепторы, рецепторы стероидных и пептидных гормонов, супрессорные гены и продукты их экспрессии, гормонозависимые белки, протеазы, участвующие в процессах метастазирования, интегрины, отвечающие за межклеточные контакты, и т.д.

Выполнение молекулярно-биологических исследований требует больших материальных затрат, и ни одно  медицинское учреждение не может позволить себе  одновременное определение всех тканевых маркеров. Из указанных выше факторов рутинное применение в клинике пока нашли  методики определения рецепторов стероидных гормонов (эстрогенов и прогестерона), а в последнее время – определение онкогена НЕR-2/neu.

Одним из первых вошедших в практику лечения больных РМЖ показателей, относящихся к категории клеточных маркеров, являлись рецепторы стероидных гормонов (РСГ), в первую очередь рецепторы эстрогенов (РЭ). Несколько позднее в дополнение к ним стали определять также рецепторы прогестерона (РП).

Рецепторы стероидных гормрнов – это белки, спецефически и избирательно связывающие соответствующие стероиды после их проникновения в клетку и опосредующие, таким образом, их биологические эффекты. Присутсвие РЭ в первичной опухоли молочной железы свидетельствует о ее потенциальной чувствительности к лечебным мероприятиям, направленным на удаление источника эстрогенов из организма или на противодействие их эффектам (овариэктомия, использование антиэстрогенов или ингибиторов ароматазы). РП представляет интерес как молекулярный маркер РМЖ не только потому, что он является первым необходимым звеном реакции клетки на прогестины и определяет ее чувствительность к соответствующим препаратам, но и потому, что его синтез в клетках РМЖ индуцируется эстрогенами. Таким образом, наличие РП может свидетельствовать о функциональной активности РЭ.

В настоящее время в различных клиниках и лабораториях используется три относительно равнозначных метода определения рецепторного статуса РМЖ: радиолигандный – оценка связывающей способности  рецепторов в цитозолях опухолей, иммуноферментный – определение концентрации иммунореактивного рецепторного белка в тех же цитозолях, и иммуногистохимический – спецефическое окрашивание срезов опухоли с помощью антител к рецепторным белкам.

Преимуществом первых двух методов является их количественный характер, позволяющий оюъективизировать критерии оценки  рецепторного статуса. Радиолигандный метод позволяет  также оценить и функциональную активность рецептора на одной из первых стадий его взаимодействия с гормоном, что делает прогноз гормоночувствительности более надежным, чем приопределении иммунореактивных белков.

С другой стороны, иммуногистохимический метод, хотя и ности относительно субъективный полуколичественный характер, имеет важное достоинство, заключающееся в том, что при окрашивании срезов можночетко определить принадлежность рецепторов именно опухолевым клеткам, что практически невозможно при использовании биохимических методов. Кроме того, этот метод позволяет  работать с архивным материалом – парафиновыми блоками и даже готовыми стеклами, что делает его единственно возможным вариантом в тех случаях, когда необходимость исследования рецепторов стероидных гормонов возникла или была осознана через длительное время после операции.

При использовании иммуногистохимического метода результаты исследования многих авторов были довольно сходными по значению: РЭ и РП выявлены в 67-78% наблюдений. Отсутсвие рецепторов обоих гормонов отмечено в среднем у 10% пациенток. РП более стабильны и поэтому их выявляют чаще (78-86%). Для обнаружения РЭ важно правильно и своевременно фиксировать операционный материал в формалине. Результат реакции, когда отсутсвует РЭ, но выявляется РП, по-видимому, следует считать артефактом.

Известно, что гормонозависимые опухоли молочной железы, содержащие оба или хотя бы один из рецепторов стероидных гормонов, имеют более благоприятное течение, и послеоперационный прогноз у больных такими опухолями, независимо от проводимого адъювантного лечения, лучше, чем у больных с рецептороотрицательными опухолями. Тем не менее, наиболее важной в практическом отношении областью использования результатов определения рецепторов стероидных гормонов является отбор больных, чувствительных к эндокринной терапии.

Адъювантная эндокринная терапия наиболее эффективна у больных первичными опухолями с высоким уровнем рецепторов стероидов. Приметастатических поражениях степень реакции на эндокринную терапию также существенно зависит от наличия РЭ и РП в опухоли: ее эффективность составляет около 10% при РЭ-отрицательных опухолях, примерно 50% при РЭ-положительных опухолях и около 75% при опухолях, содержащих одновременно РЭ и РП. Тем не менее, резистентность к эндокринной терапии может присутствовать с самого начала, даже у РЭ- и РП-положительных опухолей, или может развиться позднее по мере прогрессирования болезни, поэтому статус рецепторов стероидных гормонов оказался необходимым, но не всегда достаточным показателем гормоночувствительности РМЖ. В связи с этим, постоянно ведется поиск дополнительных критериев, характеризующих функциональную активность рецепторов стероидных гормонов и влияние других регуляторных факторов на биологическое поведение РМЖ.

Вопросы, ответы, комментарии