Антибиотикочувствительность и резистентность стафилококков, выделенных в Республике Армения (Экспериментальная и профилактическая медицина)

Kлючевые слова: чувствительность, резистентность, стафилококки, полирезистентность

Со второй половины XIX века, когда клинически были описаны заболевания и посредством лабораторных исследований выявлены их возбудители (стафилококки), эти микроорганизмы остаются универсальными и одними из наиболее опасных возбудителей большого количества заболеваний [3]. На данный момент обнаружено более 120 нозологических единиц, возбудителями которых являются стафилококки [2].

В развитии внутрибольничных инфекций (ВБИ) могут принимать участие около 200 условнопатогенных микроорганизмов, среди них –стафилококки, синегнойная и кишечная палочки, протеи и клебсиеллы [1]. До применения антибиотиков основными возбудителями ВБИ были стрептококки, однако, начиная со второй половины прошлого столетия, ситуация резко изменилась. Они были вытеснены другими микроорганизмами, в частности стафилококками, быстро приобретшими устойчивость к антибиотикам. И уже более полувека стафилококки являются основными возбудителями ВБИ.

Исходя из вышеизложенного, нами была поставлена задача изучить чувствительность стафилококков, выделенных от больных различного профиля, к наиболее широко применяемым на практике антибиотикам.

Материал и методы

Материал, подлежащий бактериологическому исследованию, – зубной налет, материал из зубодесневого канала, аспират или мазoк из цервикального канала, моча, аспират из операционной раны, секционный материал–кусочки органов умерших новорожденных (головной мозг, печень, селезенка, лимфатический узел и т.д.) доставлялся в лабораторию в нативном виде или в физиологическом растворе. К стоматологическому материалу, аспиратy из операционной раны, осадкy центрифугированной мочи добавлялся мясо-пептонный бульон (-МПБ), к аспирату или мазку из церви-кального канала добавлялся сердечно-мозговой бульон с последую-щим инкубированием материала в термостате при температуре 37⁰С в течение 18-20ч. На второй день производился высев материала соот-ветственно на различные среды – Эндо, Плоскирёва, висмут-сульфит, солевой, 5% кровяной, 1% сахарный агары, агар Сабуро. Учет и идентификацию выделенныx культур микроорганизмов производили после инкубации посевов в термостате при температуре 37⁰С в течение 18-20 ч. Для идентификации выросших микроорганизмов производили бактериоскопию выросших колоний, предварительно окрасив мазки по методу Грама. При дифференциации выделенныx стафилококков использовали тесты патогенности – определение гемолитической, лецитиназной активности, способности к плаз-мокоагуляции, теста разложения маннита. Гемолитические свойства выделенных стафилококков определяли посредством гемолиза вокруг выросших колоний на 5% кровяном агаре. Для определения лецитиназной активности производили высев на желточно-солевой агар с инкубацией при 37^оС в течение 18-20ч. При положительном результате вокруг колоний стафилококков образовывался радужный венчик, что обусловлено выделением фермента лецитиназы и разложением лецитина, находящегося в среде. Реакцию учитывали при отраженном свете. Для определения плазмокоагулирующей активности использовали сухую цитратную кроличью плазму. Для реакции применяли плазму в разведении 1:5. Разведенную плазму разливали в стерильные центрифужные пробирки в количестве по 0,5 мл и в каждую вносили по полной петле 18-20-часовой агаровой культуры стафилококков. Для исключения самопроизвольного свертывания плазмы ставили также контроль незасеянной плазмы. Пробирки помещали в термостат при температуре 37^оС и проверяли наличие свертывания плазмы через 3ч и оставляли при комнатной температуре на 18-20 ч. Окончательный учет реакции производили на следующий день. Тест разложения маннита производился с исполь-зованием дисков из наборов СИБ Горьковского НИИ эпидемиологии и микробиологии. Расщепление маннита и изменение цвета раствора в жёлтый указывает на патогенные свойства стафилококков.

Чувствительность к антибиотикам определялась диско-диффузионным методом (70 штаммов) на твердой питательной среде АГВ (НИИ по производству питательных сред, г. Махачкала) и методом серийных разведений (19 штаммов) в плотной питательной среде в соответствии с рекомендациями, данными в методических указаниях «Об унификации методов определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам (приказ Министерства здравоохранения СССР N 250 от 13 марта 1975 г.). Результаты чувствительности диско-диффузионным методом оценивались по диаметру зоны задержки роста микроорганизмов к антибактериальным препаратам (Методические указания МУК 4.2.1 1890-0-04). Методом разведений в плотной питательной среде изучена чувствительность стафилококков, выделенных от хирургических больных к действию 10 антибиотиков: амикацина, тобрамицина, гентамицина, канамицина, ампициллина, левомицетина, карбенициллина, пенициллина, рифампицина, цефалотина, в концентрации 20 мкг/мл.

Результаты и обсуждение 

В течение 6 лет (2005-2011гг.) изучена антибиотикочувствитель-ность 89 штаммов стафилококков,из которых 54 штаммa (60,7%) от 97 больных стоматологических клиник г. Еревана, 12 штаммов от женщин с патологиями урогенитальной сферы (13,5%), 19 штаммов от 85 больных с первичными и рецидивирующими грыжами брюшной стенки(21,3%) , 3 штамма– из секционного материала четырех новорожденных (3,4%), один штамм–из детской смеси(1,1%). Видовой состав стафилококков, чувствительность которых поставлена диско-диффузионным методом, был следующим: 35 штаммов (50,0%) принадлежали к эпидермальным (Staphylococcus epidermidis), 29 (41,4%) –гемолитическим (St. haemolyticus), 6 (8,5 %) – золотистым стафилококкам (St.aureus).

Таблица 

Стафилококки, выделенные из разных источников

Штаммы стафилококков, чувствительность которых изучена диско-диффузионным методом, в 85,7% (6 штаммов из 7) случаев были резистентны к пенициллину, 77,8% (7 штаммов из 9) –полимиксину, 68,2% (15 штаммов из 22) – аугментину, 64,3 % (9 штаммов из 14) – азитромицину, 60,0% (3 штамма из 5) – ампициллину,40,0% (по 2 штамма из 5) неомицину и цефуроксиму, 36,7% (11 штаммов из 30) – стрептомицину, 35,2% (19 штаммов из 54) – доксициклину, 34,1% (15 штаммов из 44) оксациллину, 33,3% (9 штаммов из 27 и 1 штамм из 3) – соответственно цефтриаксону и линкомицину, 25,0% (1 штамм из 4) – офлоксацину, 23,1% (6 штаммов из 26) – тетрациклину, 22,2% (2 штамма из 9) – цефатаксиму, 11,1% (2 штамма из 18 и 1 штамм из 9) – соответственно канамицину и рифампицину. 7 штаммов стафилококков проявили резистентность в отношении левомицетина, кларитромицина (по 2 штамма) и цефтибутека (3 штамма). 100% чувствительность стафилококки проявили в отношении цефалотина (17 штаммов) и гентамицина (37 штаммов), 90,4% – амикацина (29 штаммов из 32), 88,9% – канамицина (16 штаммов из 18) и рифам-пицина (8 штаммов из 9), 76,9% – тетрациклина (20 штаммов из 26), 77,6% – цефазолина (38 штаммов из 49), 77,8% – цефатаксима (7 штаммов из 9), 66,7% – цефтриаксона (18 штаммов из 27), 66,7% (2 штамма из 3) – линкомицина, 65,9% – оксациллина( 29 штаммов из 44), 64,8% – доксициклина (35 штаммов из 54), 63,3% – стрептомицина (19 штаммов из 30), 31.8% – амоксиклава (7 штаммов из 22),  35,7% – азитромицина (5 штаммов из 14).

Полирезистентность от 40 до 85,7% проявили 62,9% (44 из 70) штаммов стафилококков, антибиотикочувствительность которых была поставлена диско-диффузионным методом (см.диаграмму на рис.).

 Рисунок. Антибиотикорезистентность и чувствительность стафилококков

Штаммы стафилококков, антибиотикочувствительность которых изучена методом серийных разведений (19 штаммов),проявили резистентность к левомицетину – 73,7% (14 штаммов), пенициллину – 68,4% (13 штаммов), карбенициллину – 36,8% (7 штаммов), канамицину – 26,3% (5 штаммов), ампициллину и тобрамицину – 21,1% (по 4 штамма), гентамицину, цефалотину и рифампицину – 10,5% (по 2 штамма), амикацину–5,3% (1 штамм). Из изученных 19 штаммов стафилококков 14 были полирезистентными, причем из них 92,9% (13 штаммов) были полирезистентны к 2-5, а 7,1% (1 штамм) к 7 антибиотикам.

Изучение факторов патогенности штаммов стафилококков (гемолитической, лецитиназной, плазмокоагулирующей активности, расщеплениe маннита), выделенных при хирургических вмешательствах по поводу грыж брюшной стенки показало, что 19 (61,3%) из 31 штамма стафилококков обладали теми или иными факторами патогенности. Одним признаком патогенности обладали 31,6% (6 штаммов), двумя – 36,8% (7 штаммов), тремя – 21,1% (4 штамма), четырьмя – 10,5% (2 штамма) изученных штаммов стафилококков. Выявлено также высокое носительство патогенных стафилококков у 50,9% (28 из 55 штаммов) пациентов стоматологических клиник и у 50,0% (6 из 12 штаммов) «условно» здоровых женщин репродуктивного возраста.

Таким образом, данные антибиотикочувствительности стафилококков показали, что использование антибиотиков в терапии больных различного профиля необходимо осуществлять лишь на основании результатов чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Большую озабоченность вызывает выделение патогенных стафилококков у больных, подвергшихся хирургическим вмешательствам, что свидетельствует о широкой циркуляции патогенных стафилококков в хирургических клиниках, а также их носительстве у женщин репродуктивного возраста. Выяснено, что 34,1% стафилококков обладают резистентностью к оксациллину. В последнее время метициллинрезистентные, в том числе оксациллинрезистентные штаммы стафилококков являются причиной ряда внутрибольничных вспышек в некоторых европейских странах. 

Мониторинг антибиотикочувствительности стафилококков выявил широкую циркуляцию в РА не только резистентных к отдельным препаратам, но и полирезистентных штаммов микроорганизмов.Это обстоятельство диктует необходимость осторожного и обоснованного их применения.

Поступила 23.08.11

Литература

1. Брусина Е.Б. Принципы классификации внутрибольничных инфекций. Эпидемиология и инфекционные болезни, 2000, 5, с. 31-34.
2. Дерябин Д.Г., Шагинян И.А. Вирулентность и персистенция стафилококков: феноти-пические проявления и механизмы генетического контроля. ЖМЭИ, 2000, 4, с. 36-43.
3. Lowy F. D. Staphylococcus aureus infections. N. Engl. J. Med., 1998, 339, p. 520-532.

А.В. Цаканян*, Ю.Т. Алексанян*, Г.Г. Мелик-Андреасян*,  К.Л. Мамиконян*, Г.Ж.Ханджян*, А.С. Закарян** *НИИ эпидемиологии, вирусологии и медицинской паразитологии  им. А.Б.Алексаняна МЗ РА **Кафедра патанатомии ЕГМУ им. М. Гераци 0060, Ереван, ул.Худякова, 1 УДК 616.9-02  

Вопросы, ответы, комментарии