Действие иммуностимулирующего препарата “Эхинацея Гексал” и растительного антигельминтика на систему “паразит-хозяин” при экспериментальном трихинеллезе крыс

Ключевые слова: трихинелла, иммуностимулятор, фитопрепараты, РНК, гликоген, естественная резистентность

Основной метод лечения паразитарных инвазий – специфическая химиотерапия. Вместе с тем остается ряд гельминтозов, химиотерапия которых практически не разработана или далека от совершенства (трихинеллез, эхинококкоз, опистархоз и др.).Даже при эффективной химиотерапии внезапное устранение паразита с одновременным прекращением его иммунодепрессивного воздействия и поступлением в ткани значительного количества продуктов распада погибших паразитов может способствовать вспышке иммунопатологических реакций.

Актуальность использования лекарственных растений возросла в последние десятилетия. Преимуществом фитопрепаратов является их малая токсичность и возможность длительного применения без существенных побочных явлений. 

Целью нашей работы явилось изучение влияния растительного иммуностимулятора и фитопрепаратов на структуру и функциональную активность тканей личинок трихинелл и их хозяев при экспериментальном трихинеллезе крыс.

Материал и методы

Эксперимент проводили на белых беспородных крысах-самцах массой 150-170 г. Животные были разделены на 5 групп по 5 голов в каждой. Первая группа – интактная, вторая – заражалась смешанной инвазией личинками трихинелл, третья – заражалась смешанной инвазией личинками трихинелл и получала фитоантигельминтик в течение 5 дней с 16-го дня после заражения. Четвертая – заражалась смешанной инвазией личинками трихинелл и в течение 5 дней до заражения получала иммуностимулятор растительного происхождения. Пятая – заражалась смешанной инвазией личинками трихинелл и получала иммуностимулятор в течение 5 дней до заражения и фитоантигельминтик в течение 5 дней с 16-го дня после заражения.

Доза заражения на животного составила по 10 личинок Trichinella spiralis и T.pseudospiralis на 1 г массы тела.

В качестве растительного сбора из лекарственных растений были использованы: цветки полыни цитварной (Fl.Artemisia citvarnia L.), бессмертник песчаный (Helichrysum arenarium L.) и цветки пижмы обыкновенной (Fl.Tanacetum vulgare L.) в соотношении соответственно: 0,5: 1: 3. Животные получали препарат вольным способом с кормом в дозе 50 мг/кг массы тела.

В качестве иммуностимулятора нами был использован препарат “Эхинацея Гексал”, активной составной частью которого является сок из свежей цветущей травы эхинацеи пурпурной ( 100 г раствора содержит 80 г сока из свежей цветущей травы эхинацеи пурпурной –1,5-2,5:1) [1,3,4]. Забор образцов крови проводили натощак из хвоста на 35-й день после заражения. Часть каждого образца (цельная кровь) использовали для определения фагоцитарной активности лейкоцитов, Т-лимфоцитов и эозинофилов. Из другой части получали сыворотку, которую использовали для определения общей гемолитической активности комплемента, лизоцимной и бактерицидной активности крови. Животные были вскрыты под наркозом на 35-й день после заражения. 

Нами были учтены следующие факторы естественной резистент-ности: бактерицидная активность сыворотки крови, которую определяли фотонефелометрическим методом, основанном на учете изменений оптической плотности среды [6]; лизоцимная активность сыворотки крови исследуется на стерильной сыворотке.В качестве индикатора активности лизоцима применяли суточную культуру Micrococcus lysodeicticus, выращенную на МПА по обычной методике. Культуру смывали 0,5% стерильным раствором поваренной соли и доводили по оптическому стандарту до 1 млрд микробных тел в 1 мл.

Нами применялся фотоэлектроколориметрический метод определения лизоцимной активности сыворотки крови, модифицированный отделом зоогигиены Украинского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии (Марков Ю.М. и др., 1974 [цит. по 6]), комплементарную активность сыворотки крови определяли с помощью колориметрической методики, описанной Г.Ф.Вагнером(1963) [цит. по 6], фагоцитарная активность выражается процентным отношением активных лейкоцитов, участвовавших в фагоцитозе, к общему числу подсчитанных нейтрофильных лейкоцитов. Определяли фагоцитарную активность лейкоцитов по В.С.Гостеву (1950) [цит. по 6].

Для оценки Т-системы иммунитета нами ставилась реакция спонтанного комплементарного розеткообразования, количественное изучение Т-лимфоцитов проводили в реакции спонтанного розеткообразования по M.Joundal (1872) [цит. по 6].

Результаты исследований обработаны статистически с помощью методов вариационной статистики. Достоверность различия двух средних значений, полученных в разных условиях опытов, определяли по критерию Стьюдента .

Результаты и обсуждение

У контрольно-зараженных животных наблюдались ангиомиозит, гепатит, холангит и эррозивно-геморрагический энтероколит. Все заболевания имели неспецифический аллергический характер [2,5]. 

Применение “Эхинацеи Гексал” в течение пяти дней до заражения крыс личинками трихинелл дало положительный эффект. В частности, в мышечной ткани патомикроморфологические изменения были более сглажены по сравнению с таковыми у контрольно-зараженных животных. 

Стимулировались гипертрофия ядер и перераспределение их в саркоплазме. Часть личинок T.spiralis и T.pseudospiralis задерживалась и погибала в капиллярах эндо- и перимизия. Задерживалась во времени инкапсуляция личинок T.spiralis. Интенсифицировалась клеточно-воспалительная реакция, особенно в периваскулярной области, вокруг личинок T.pseudospiralis и по полюсам капсул с личинками T.spiralis. В инфильтрате преобладали лимфоидные элементы, но также присутствовали и плазматические клетки. В печени увеличивалось количество купферовых клеток, они были гипертрофированными, а в цитоплазме выявлялись темные гранулы.Увеличивалось количество двухъядерных гепатоцитов и уменьшалось число клеток, находящихся в состоянии мутного набухания. В паренхиме, особенно в области дискомпозиции трабекул, обнаруживались очаги круглоклеточной инфильтрации. В кишке заметно снижались слизеобразующая функция бокаловидных клеток и дескваматозная реакция. Реактивные центры лимфатических фолликулов резко активизировались в отношении продуцирования лимфобластов и лимфоцитов. Увеличилась степень инфильтрации собственной пластинки оболочки ворсинок лимфоцитами, мононуклеарами и эозинофилами.

Количество и распределение таких жизненно важных соединений, как РНК и гликоген были близки к показателям, имеющимся у личинок контрольно-зараженных животных. Максимальную положительную реакцию на присутствие РНК и гликогена проявили стихоциты. Сильные пиронинофилия и ШИФФ-реакция были характерны для гиподермы и плазматических сумок соматических мышечных клеток: РНК окрашивалась диффузно, а гликоген концентрировался в плотные глыбки. Умеренные реакции, идентифицирующие РНК и гликоген, были типичны для средней и генитальных желез личинок.Что касается капсул с заключенными в них личинками T.spiralis,то только в наружном слое капсул проявилась умеренная реакция на присутствие кислых полисахаридов; в интракапсулярной саркоплазме гликоген и РНК отсутствовали.

В мышцах, печени и тонких кишках крыс содержание РНК и гликогена было несколько повышено, по сравнению с таковыми в аналогичных органах контрольно-зараженных животных. Однако характер цито- и гистотопографии этих соединений не изменился. По сравнению с интактными животными, в печени которых пиронинофилия и ШИК-реакция были чрезвычайно интенсивными, а РНК и гликоген распределялись в гепатоцитах равномерно, в печени крыс, получавших биостимулятор до заражения, так же как и в печени контрольно-зараженных крыс, интенсивность реакций на гликоген и РНК варьировала от умеренной до относительно слабой, причем эти соединения распределялись зонально. 

После терапии инвазированных животных фитоантигельминтиком в течение пяти дней с 16-х суток после заражения наблюдалась деструкция личинок трихинелл обоих видов и капсул вокруг личинок T.spiralis. Так, изменялись форма и контуры большинства капсул, а гиалиновый слой имел фестончатый вид, вследствие неравномерного утолщения. Внутрикапсулярная саркоплазма сильно вакуолизировалась или полностью превращалась в грубозернистую массу, но во всех случаях отделялась от тела личинок T.spiralis. В некоторых капсулах наблюдались некроз и лизис внутрикапсулярной саркоплазмы. По полюсам капсул резко активизи-ровалась клеточно-воспалительная реакция: инфильтрат включал лимфоциты, нейтрофилы, эозинофилы, гистиоциты и фибробласты.У большинства личинок T.spiralis и T.pseudospiralis нарушались тинкториальные свойства кутикулы, она становилась грубобугорчатой и местами отторгалась от гиподермы. Гиподерма и плазматические отделы мышечных клеток сильно вакуолизировались. На препаратах выявлялись погибшие личинки T.pseudospiralis. Некротизированные личинки замещались обширным и плотным клеточно-воспалительным инфильтратом, в состав которого входили лимфоциты, нейтрофилы, моноциты, плазматические и гигантские многоядерные клетки. Фрагменты погибших личинок T.spiralis лизировались внутри капсул.

В мышцах, печени и тонких кишках ослаблялись признаки пато-генеза и наблюдались характерные черты компенсаторных и регенера-тивных процессов. В частности, в мышечной ткани формировались соединительнотканые рубцы, замещавшие разрушенные мышечные волокна и их фрагменты. Компенсаторная гипертрофия была характерна прежде всего для ядер миосимпласта. Наблюдалось перераспределение ядер:многие из них перемещались в периферические зоны саркоплазмы и цепочкой располагались под сарколеммой. Это явление свидетельствовало о тенденции к восстановлению нормальной структуры мышечных волокон. Изредка встречались амиотические деления ядер, вследствие чего увели-чивалось число ядер,утраченных в результате кариопикноза и карио-рексиса.

В печени наблюдалось частичное восстановление структуры и архитектоники трабекул, особенно в маргинальных зонах печеночных долек. Увеличивалось число двухъядерных гепатоцитов; многие из них были гипертрофированными.У пролеченных крыс подвергались обратному развитию дистрофические изменения большинства гепатоцитов. В результате фитотерапии в целом снижалась инфильтрация паренхимы печени лейкоцитарными элементами. Остаточные следы инфильтрации сохранялись вокруг желчных протоков, полнокровных расширенных центральных вен и портальных венозных сосудов. Ширина просветов синусоидов, а также количество и размеры купферовых клеток приближались к норме.

В кишках наблюдались ослабление дескваматозной реакции и восстановление структуры ворсинок. Слизеобразующая функция бокаловидных клеток и их размеры приближались к норме. В энтероцитах уменьшалось количество интраэпителиальных лимфоцитов. 

Гистохимические исследования показали, что после лечения крыс фитоантигельминтиком в тканях выживших личинок трихинелл обоих видов были довольно слабыми реакция на гликоген и пиронинофилия. Исключением явились стихоциты среднего и заднего отделов стихозомы, показавшие умеренные пиронинофилию и ШИК-реакцию. В стенке капсул с заключенными личинками T.spiralis выявлялись кислые мукополисахариды. В мышцах,печени и кишке крыс в целом значительно интенсифицировались синтез РНК и образование гликогена. Изменились также цито- и гистотопография РНК и гликогена.

После сочетанного применения двух фитопрепаратов (биости-мулятора в течение пяти дней до заражения и фитоантигельминтика в течение пяти дней с 16-ых суток после инвазии) патомикроморфоло-гические изменения личинок и капсул оставались такими же, как и после терапии одним фитоантигельминтиком. В целом не изменялись микроструктура и характер компенсаторных и восстановительных процессов в мышцах, печени и кишке крыс. Однако в печени наблюдалась определенная интенсификация регенерации, одной из черт которой было увеличение двухъядерных гепатоцитов.

Содержание и топография РНК и гликогена в тканях выживших личинок T.spiralis и T.pseudospiralis,а также в мышцах, печени и кишке крыс оставались на том же уровне и в тех же пределах, что и после действия одного фитоантигельминтика.

Фитоантигельминтный препарат существенно снижал интенсив-ность инвазии и показатели неспецифического  иммунитета  (таблица).  

Таблица 

Показатели неспецифического иммунитета экспериментальных животных под действием иммуностимулятора и фитоантигельминтика ( n = 5)

 * Р › 0,05 ; **Р > 0,01

По сравнению с контрольно-зараженными животными комплементарная активность крови снизилась и составила 11±0,88%; количество эозинофилов и Т-лимфоцитов соответствует 87,1 и 64,8%, лизоцимная активность сыворотки крови, бактерицидная и фагоцитарная активность соответственно 34,5; 44,5 и 58,5%. Интенсивность инвазии составила 10,4 личинки/г, что по отношению с контрольно-зараженными животными меньше на 68%. 

Таким образом, препарат “Эхинацея Гексал” , применяемый с кормом в течение 5 дней до заражения крыс личинками трихинелл в дозе 70 мг/кг массы тела проявлял свойства иммуномодулятора. В тканях зараженных животных интенсифицировался клеточный иммунитет. Наблюдались гибель и резорбция личинок трихинелл.

Действие данного фитопрепарата-антигельминтика было впервые изучено на мышечный трихинеллез у крыс. Фитоантигельминтик, применяемый в течение 5 дней, начиная с 16-го дня после заражения, проявлял выраженное трихинеллоцидное действие. В мышцах, печени и тонких кишках животных наблюдалось усиление синтеза РНК и гликогена, ослабление патоморфогенеза и устойчивые признаки компенсаторных и регенеративных процессов.

Поступила 06.12.09.

Литература

1. Абрамычева Н.В., Шайдуллина Г.Г., Баширова Р.М., Ямалеева А.А., Никитина Т.И. Оценка иммунной активности эхинацеи пурпурной Echinacea purpurea (L.) Moench., выращенной в Башкортостане. Изучение и использование эхинацеи. Мат. Междунар. научн. конф., Полтава, 21–24 сентября 1998 г. Полтава, 1998, с. 97–100. 
2. Бекиш О.Я., Никулин Ю.Т., Бекиш В.Я., Калинин П.В. Современные аспекты патогенеза трихинеллеза. Зооантропоноз.болезни,меры профилактики и борьбы. Минск,1997, с.151-152. 
3. Винтер Гриффит. Справочник. Витамины, травы, минералы и пищевые добавки. М., 2000.
4. Дубинская Г.М., Почерняева В.Ф., Островская Г.Ю., Бобырев В.Н. Клиническое испытание фруктовых соков с включением экстракта эхинацеи пурпурной. Изучение и использование эхинацеи: Мат. Междунар. научн. конф., Полтава, 21–24 сентября 1998, с. 126–128 
5. Озерецковская Н.Н. Органная патология в острой стадии тканевых гельминтозов: роль эозинофилии крови и тканей, иммуноглобулинемии Е, G4 и факторов, индуцирующих иммунный ответ. Мед. паразитология и паразитарные болезни, 2000, 3, с. 3-8.
6. Плященко С.И., Сидоров В.Т. Естественная резистентность организма животных. Л.,1979.

Вопросы, ответы, комментарии